Biotech-Wissenschaftler, der Konzepte im Labor umsetzt

• Großskalige Reinigung rekombinanter monoklonaler Antikörper, die von Säugerzellen sezerniert wurden (Kundenprojekte internationaler Pharmaunternehmen)
• Schulung und Anleitung von 5 Teamkollegen und 2 Kollegen aus anderen Teams in der Optimierung der Expression und Reinigung bakterieller Proteine sowie menschlicher intrazellulärer Proteine

Projekt: Untersuchung der strukturellen Rolle von Membranproteinen bei der Erzeugung und Aufrechterhaltung der stark gekrümmten röhrenförmigen Morphologie des glatten endoplasmatischen Retikulums (ein Phänotyp, der bei mehreren neurodegenerativen Erkrankungen gestört ist)

• Klonierung isoformspezifischer ORFs von fünf vollstängigen integralen Transmembranproteinen (Protrudin, RTN2, RTN3, RTN4, Arl6IP1; Größe zwischen 23 und 127 kDa) aus Maus-cDNA, Entwurf und Modifikation von Expressionsvektor-Backbones
• Durchführung der Expression rekombinanter Membranproteine in Suspension von HEK-Zellen und großskaliger Reinigung von Membranproteinen für Röntgenkristallographie und Kryo-Elektronenmikroskopie
• Etablierung von HEK-Zellkulturen in Suspension im Labor und entsprechender Transfektionsprotokolle
• Projektplanung, Durchführung von Experimenten, Entwicklung neuer Protokolle und Verfahren, Analyse und Interpretation der Ergebnisse
• Schulung interner und externer Laborstudierender in den neu etablierten Protokollen
• Aufbau eines neuen Forschungsschwerpunkts im Labor und Einwerbung unabhängiger staatlicher Forschungsgelder (ICMR-DHR) für dieses Projekt

Projekt I: Biochemische und funktionelle Charakterisierung des zytoskelettalen Proteins SEPT7

• Erstellung von SEPT7-Mutantenkonstrukten, Etablierung induzierbarer stabiler Maus-embryonaler Fibroblasten-Zelllinien und transiente Transfektion von HEK- und HeLa-Zellen zur Untersuchung von SEPT7-Mutationen mittels Mikroskopie und biochemischer Assays
• Durchführung von GTPase-Aktivitätsassays für rekombinant aus E. coli gereinigte Mutanten; Daten in einer Publikation und einer Übersichtsarbeit zusammengefasst
• Schulung technischen Personals (1)
• Entwicklung und Optimierung eines zellinternen biolumineszenten Reporter-Assays zur dosisabhängigen Überwachung von SEPT7–SEPT7- und SEPT6–SEPT7-Interaktionen in lebenden, adhärenten HEK-Zellen

Projekt II: Herstellung von Subkomplexen des ~1 MDa schweren mammalen Apaf-1-Apoptosoms

• Subklonierung des humanen Apaf-1-ORF (137-kDa-Protein) in verschiedene Expressionsvektoren, Entwurf von Trunkierungskonstrukten für stabile Proteindomänen und Modifikation der Vektor-Backbones
• Durchführung der rekombinanten Proteinproduktion in E. coli, Dictyostelium und Sf9-Insektenzellen; Fehlerbehebung bei den Bedingungen zur Stabilisierung aggregierender Apaf-1-Subdomänen
• Schulung eines Anwenders (1) und technischen Personals (1) in der Proteinexpression mit Sf9-Insektenzellen